Química

Curso práctico 5: PCR inversa - deleción de segmentos génicos

Curso práctico 5: PCR inversa - deleción de segmentos génicos



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

La plantilla de ADN

Una plantilla de ADN es la plantilla que se va a duplicar (amplificar) mediante la PCR.

La plantilla (engl. plantilla "plantilla", "patrón") es en la mayoría de los casos un ADN monocatenario o bicatenario. Las moléculas de ARN también pueden usarse como plantillas para una PCR, pero primero deben convertirse en ADN mediante transcripción inversa. Las ADN polimerasas solo reconocen al ADN como sustrato.

En los exámenes forenses, las células completas se utilizan a menudo directamente para la PCR, por ejemplo, a partir de trazas de sangre y espermatozoides o de las raíces del cabello. Aquí, el cebador seleccionado debe coincidir con el ADN deseado de manera óptima para obtener la menor cantidad posible de subproductos inespecíficos en la PCR, que en estas condiciones contiene un gran número de moléculas de ADN celular diferentes.

En principio, una sola molécula de ADN molde es suficiente para una PCR (ver también Aplicaciones en Paleontología). Sin embargo, el rendimiento de una PCR depende en gran medida de la calidad de esta molécula de ADN. En las muestras de ADN de huesos fósiles o de cadáveres gravemente descompuestos, el ADN a menudo se daña por el proceso de envejecimiento o las condiciones de almacenamiento. En este caso, la plantilla debe ser más o menos pura en el lote de prueba. Con cada PCR es esencial asegurarse de que no hay contaminación, por ejemplo, de enfoques anteriores de PCR (ContinuarEfecto) a través de las células de la piel del personal del laboratorio o de los materiales utilizados. En un caso de asesinato destacado, esto condujo a resultados muy sorprendentes (informe sobre Stern.de, 26 de marzo de 2009).

Parámetros para una plantilla óptima

Varios parámetros influyen en la calidad del ADN para la PCR:

  • Contaminación química del proceso de aislamiento del ADN La polimerasa es una enzima sensible. Incluso trazas de productos químicos como el fenol, agentes quelantes como EDTA1), Cloroformo, detergentes (SDS2), Sarkosyl) o el etanol pueden inhibir una PCR. Estos productos químicos se utilizan en el aislamiento del ADN y deben eliminarse completamente del ADN antes de la PCR.
  • Cantidades de ADN utilizadas Si se utilizan menos de 10 ng de ADN genómico en la PCR, se debe aumentar el número de ciclos y arranque en caliente-La PCR se puede realizar para aumentar el rendimiento y la especificidad de la reacción.Las cantidades óptimas son 1-10 ng para ADN bacteriano, 0.1-1 ng para ADN plasmídico y un máximo de 200 ng ADN genómico.


Video: PCR: Reacción en cadena de la polimerasa TEÓRICO Y PRÁCTICO (Agosto 2022).