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Espectroscopía UV / VIS o espectroscopía de fluorescencia
El pico de absorción del ácido ascórbico en el espectro UV / VIS a 265 nm (a pH = 7) no se puede utilizar para determinar el contenido de ácido ascórbico en las muestras: muchas sustancias que normalmente también están contenidas en las muestras (por ejemplo, varios azúcares), también absorben luz en este rango de longitud de onda.
Por esta razón, el ácido dehidroascórbico tampoco es accesible para tal detección directa, especialmente porque su absorción a 210 nm tiene solo una baja intensidad.
Por tanto, el análisis del ácido ascórbico mediante UV debe ir precedido de una conversión química.
O se utiliza el poder reductor del ácido ascórbico (detección indirecta por reacción redox) o el ácido deshidroascórbico se deriva en productos coloreados (o fluorescentes). La siguiente figura muestra una selección de posibles reacciones de detección.
Estos métodos solo se pueden utilizar para determinar el contenido de ácido ascórbico (forma reducida) o el contenido total de vitamina C (después de la oxidación). Si se va a determinar el contenido de los componentes individuales (ácido ascórbico, ácido deshidroascórbico o ácido 2,3-dicetogulónico), tratamientos adicionales de la muestra para reducir (u oxidar) las especies a detectar y una diferencia posterior entre los resultados de la medición. ¡son necesarios!
Ventajas:
Aunque el uso de espectroscopía UV / VIS o de fluorescencia para determinar la conversión de ácido ascórbico o sus productos de oxidación es más fácil y más preciso de manejar que p. la titulación redox clásica, siguen existiendo desventajas significativas de la g. "método químico" obtenido.
Desventaja:
- falta de especificidad (fuerte interferencia de otras sustancias reductoras)
- incorrecto en el caso de oxidación (parcial) del ácido ascórbico antes de la medición
- Alto esfuerzo preparativo y que requiere mucho tiempo para determinar los componentes individuales
- Sensibilidad insuficiente en el análisis de bajas concentraciones de ácido ascórbico.
Por lo tanto, estos métodos son particularmente importantes en el análisis de alimentos, donde las concentraciones de vitamina C en las muestras son comparativamente altas y la determinación del contenido total de vitamina C suele ser suficiente.
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