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Herramientas de ingeniería genética

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Tipos de endonucleasas de restricción

Hay tres tipos de endonucleasas de restricción; Las enzimas de tipo II son particularmente importantes para la ingeniería genética.

Endonucleasas de restricción de tipo I

Estas enzimas tienen actividad endonucleasa y ADN metilasa. Son grandes complejos de proteínas formados por muchas subunidades. Requieren un sitio de unión específico de 15 pares de bases de largo en el ADN, que metilan o cortan de manera inespecífica el ADN de esta posición a una distancia de aproximadamente 1000 pares de bases desde el extremo 5 '. La fuerte actividad ATPasa de las endonucleasas de restricción de tipo I es particularmente digna de mención. La migración de las enzimas a lo largo del ADN consume mucha energía, de modo que por cada enlace fosfodiéster escindido, más de 10.000 moléculas de ATP se convierten en ADP y fosfato inorgánico. Las enzimas de esta categoría carecen en gran medida de interés para la ingeniería genética, ya que solo los sitios de unión en el ADN, pero no las interfaces, son específicos.

Endonucleasas de restricción de tipo II

Las endonucleasas de restricción de tipo II son las endonucleasas de restricción más comúnmente utilizadas cuando se trabaja con ADN recombinante porque los sitios de escisión y reconocimiento específicos son idénticos al resto de los tipos de endonucleasas de restricción. Esto permite un aislamiento preciso de fragmentos de ADN con una longitud definida y extremos definidos. En la actualidad se conocen más de 3.000 enzimas de este tipo de diversas especies bacterianas, y cerca de 1.000 de ellas también están disponibles comercialmente. Las endonucleasas de restricción de tipo II son independientes de sus correspondientes metilasas de modificación y no requieren ATP. Las secuencias de reconocimiento cubren un rango de secuencia principalmente palindrómico con 4-8 pares de bases.

Endonucleasas de restricción de tipo III

Las endonucleasas de restricción de tipo III, como las endonucleasas de restricción de tipo I, tienen actividad endonucleasa y metilasa. Este tipo de enzima también corta el ADN de manera inespecífica fuera de la secuencia de reconocimiento, pero a una distancia de solo unos 5-20 pares de bases. El consumo de ATP de las endonucleasas de restricción de tipo III está, por tanto, claramente por debajo del consumo de las enzimas de tipo I, ya que debe pasarse un segmento de ADN significativamente más corto al migrar desde la secuencia de reconocimiento a la posición de la interfaz.


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